黄芩为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根,具有清热燥湿,泻火解毒,止血安胎等作用[1]。现代研究表明,黄芩中黄酮类化合物为其主要有效成分,其中含量较高的有黄芩苷(baicalin)、汉黄芩苷(wogonoside)、黄芩素(baicalein)、汉黄芩素(wogonin)和千层纸素A(oroxylin A)等[2]。黄芩药材和不同商品规格的质量评价多以黄酮类成分为指标[3-5],亦有多糖成分的比较报道[6]。我国商品黄芩主产于甘肃,2012年全省播种面积7.8万亩,为甘肃“十大陇药”之一[7]。黄芩属于多年生草本植物,具有比较发达的根系,人工栽培商品多采自2年或3年生的根,产地将主根加工商品供药用,而占根系重量5%~28%左右的侧根、须根产地一般弃去不用,实际上造成很大的浪费。本研究采用HPLC梯度洗脱法分析了黄芩根系中4种黄酮类成分的含量,以期为人工种植黄芩品种培育和合理利用黄芩植物资源提供科学依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器及试药 美国 Waters 515泵,2487紫外检测器,717自动进样器。Sartorius R200D型分析天平(赛多利斯科学仪器有限公司)。黄芩苷(批号:-,含量以91.7%计算)、汉黄芩苷(批号:880-,含量以98.94%计算)、黄芩素(批号:-)、汉黄芩素(批号:-)对照品由中国食品药品检定研究院提供。甲醇为色谱纯(山东禹王实业禹城化工厂,批号),水为纯净水,其余试剂为分析纯。
1.2 实验样品 黄芩Scutellaria baicalensis Georgi采集于甘肃省陇西县菜子镇,由兰州大学药学院马志刚教授鉴定。
2 方法与结果
2.1 不同黄芩根系与产量比较 采挖2年生的栽培黄芩后,对根系状况进行观察,主要有鸡爪系(约占26%~32%)、直根系(约占42%~62%)和独根系(约占16%~25%)3类根系。分别取不同根系的黄芩4~5枝根,对其重量分别进行称量,计算平均比例。见表1。
表1 黄芩不同根系重量分数和平均比例注:“-”示没有此根系。样品 总质量/g根茎/% 主根/%一歧根/%二歧根/%须根/%鸡爪系1 6.9167 16.93 43.09 30.30 5.21 3.33鸡爪系2 6.4958 19.89 31.34 19.82 24.42 4.52直根系1 9.4030 20.98 57.18 4.95 - 10.51直根系2 6.6700 16.72 57.95 19.58 - 3.36独根系1 5.8416 18.90 74.24 - - 4.74独根系2 7.1283 15.48 76.23 - - 8.29
黄芩样品中,以鸡爪系计算,主根占黄芩根系的31%~43%,一歧分支根一般保留药用,占黄芩根系的19%~30%,二歧分支根和毛根商品弃去不用,占黄芩根系的8%~28%。直根系中毛根占黄芩根系的3%~11%。独根系中毛根占黄芩根系的5%~8%。以2015年陇西县种植6万亩,亩产干货185千克计算,按最低根系比例估计,大约46万公斤的黄芩根弃去,这是相当大的生物产量。
2.2 含量测定
2.2.1 色谱条件 色谱柱:迪玛C18柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm);流动相:甲醇为流动相A,0.1%磷酸为流动相B,按表2程序梯度洗脱;检测波长:280 nm;流速:1.0 mL/min;柱温:室温。理论板数:按黄芩苷峰计算应不低于3000。见表2。
表2 梯度洗脱时间/m i n 流动相A/% 流动相B/% 0~25 40→60 60→40 25~30 60→70 40→30 30~35 70→80 30→20 35~40 80→60 20→40 40~45 60→40 40→60 45~55 40 60
图1 对照品溶液H PLC色谱图
2.2.2 对照品溶液的配制 分别精密称取黄芩苷3.80mg、汉黄芩苷5.48 mg、黄芩素10.88 mg和汉黄芩素5.31 mg对照品,分别置25 mL量瓶中,用甲醇配制成浓度分别为152、219.2、435.2和212.4 μg/mL的储备液。取各对照品储备液适量,甲醇稀释配制成不同浓度的标准工作曲线溶液。
2.2.3 供试品溶液的配制 分别称取60℃干燥4小时的各种黄芩中粉约0.3g,精密称定,加75%乙醇40 mL,加热回流1小时,过滤,滤液置100 mL量瓶中,用少量75%乙醇分次洗涤容器和残渣,洗液并入同一量瓶中,加75%乙醇至刻线,摇匀;精密量取溶液1 mL于10 mL量瓶中,用75%乙醇稀释至刻度线,既得。
2.2.4 线性关系的考察 精密吸取黄芩苷对照品溶液(152 μg/mL)10、20、30、40和50 μL;精密吸取汉黄芩苷对照品溶液(2.192 μg/mL)1、5、10、15和20 μL;精密吸取黄芩素对照品溶液(8.704 μg/mL) 4、8、10、12和14 μL;精密吸取汉黄芩素对照品溶液(2.124 μg/mL)1、5、10、20和30 μL,依次注入高效液相色谱仪,测定峰面积,以对照品进样量(X)为横坐标,峰面积积分值(Y)为纵坐标,绘制标准曲线,分别得回归方程为:
结果表明黄芩苷进样量在1.52~7.6 μg、汉黄芩苷进样量在0.003~0.043 μg、黄芩素进样量在0.035~0.122 μg和汉黄芩素进样量在0.002~0.064 μg范围呈良好的线性关系。见图1—2。
图2 样品溶液H PLC色谱图
文章来源:《中国资源综合利用》 网址: http://www.zgzyzhly.cn/qikandaodu/2021/0122/842.html
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